國家自然科學(xué)基金重大重點(diǎn)項(xiàng)目
近年來，我校作為項(xiàng)目牽頭單位承擔(dān)了國家自然科學(xué)基金重大重點(diǎn)項(xiàng)目7項(xiàng)，立項(xiàng)總經(jīng)費(fèi)達(dá)2277萬元，這些項(xiàng)目為解決中醫(yī)藥學(xué)科關(guān)鍵基礎(chǔ)科研問題提供了重要的理論指導(dǎo)和技術(shù)支持。項(xiàng)目在執(zhí)行過程中，科技處積極協(xié)助處理項(xiàng)目管理工作，通過科研人員的通力合作，6個(gè)結(jié)題項(xiàng)目全部通過基金委組織的的專家驗(yàn)收，并在基礎(chǔ)研究方面取得了顯著的科研成果，為后續(xù)的項(xiàng)目驗(yàn)收奠定了良好的基礎(chǔ)。
項(xiàng)目名稱：穴位敏化的客觀顯像研究
項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：李志剛
成果介紹：
項(xiàng)目以穴位敏化客觀成像研究為中心，運(yùn)用光聲成像進(jìn)行膝骨關(guān)節(jié)炎、心肌梗死模型動(dòng)物的穴位敏化的微血管形態(tài)成像研究；運(yùn)用激光散斑成像技術(shù)進(jìn)行穴位敏化的微循環(huán)灌注量研究，完成了穴位敏化的組織微循環(huán)層次的客觀顯像研究；本項(xiàng)目運(yùn)用軟X射線納米CT完成穴位敏化的細(xì)胞結(jié)構(gòu)3D成像；運(yùn)用傳統(tǒng)甲苯胺藍(lán)染色、透射電鏡、免疫熒光等技術(shù)進(jìn)行穴位敏化細(xì)胞水平的2D成像，完成了穴位敏化的細(xì)胞層次客觀顯像研究；本項(xiàng)目運(yùn)用金納米微粒構(gòu)建可活體標(biāo)記敏化重要分子5-HT的分子探針，并在膝骨關(guān)節(jié)炎、心肌梗死模型2種動(dòng)物載體上應(yīng)用活體熒光和磁共振兩個(gè)成像平臺(tái)對(duì)不同疾病小鼠進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)的成像觀察，實(shí)現(xiàn)了穴位敏化的分子層次的客觀顯像研究。
項(xiàng)目在執(zhí)行期內(nèi)完成全部研究既定目標(biāo)，并取得以下成果：
（1）首次搭建了對(duì)小鼠活體穴區(qū)檢測(cè)的光聲成像的平臺(tái)與方案實(shí)現(xiàn)了對(duì)小鼠膝關(guān)節(jié)、肘部穴區(qū)及背部穴區(qū)的活體動(dòng)態(tài)成像，并編寫了用于分析穴區(qū)光聲成像數(shù)據(jù)的基于 MATLAB 軟件的計(jì)算代碼，完成了本項(xiàng)目光聲成像數(shù)據(jù)分析。
（2）首次搭建了對(duì)小鼠穴區(qū)組織透析液中肥大細(xì)胞成像的納米 CT 成像平臺(tái)，并制定了本項(xiàng)目組的分割方案，即基于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、前期電鏡研究的先驗(yàn)知識(shí)等，對(duì)納米 CT 斷層掃描的單層圖像進(jìn)行手動(dòng)分割，隨即進(jìn)行 LAC 運(yùn)算，結(jié)合形態(tài)綜合判斷與確認(rèn)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。最終基于 AMIRA 軟件對(duì)所分割亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的內(nèi)徑、體積和密度進(jìn)行量化分析。
（3）利用納米金顆粒成功偶聯(lián) IR780、PEG 化 Fe3O4 及 Anti-5-HT antibody，合成了能夠特異性活體標(biāo)記 5-HT，并且在光學(xué)、磁共振兩種平臺(tái)成像的生物分子探針。
本研究獲取了穴位敏化局部由生理“沉寂”狀態(tài)到病理“敏化”狀態(tài)以及疾病不同程度的客觀顯像與動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)，通過量化結(jié)果揭示穴位敏化的特征性改變，豐富與完善了腧穴理論。同時(shí)，本項(xiàng)目開發(fā)了穴位敏化的分子顯像探針，為客觀呈現(xiàn)穴位敏化過程提供了先進(jìn)、可靠的工具。 本項(xiàng)目已完成組建一支長期合作、多學(xué)科交叉的高層次創(chuàng)新研究隊(duì)伍。已在國際會(huì)議或國內(nèi)外有影響的期刊發(fā)表論文 20余篇，另有 3 篇在審稿中，4 篇在撰寫中。 項(xiàng)目組成員在本項(xiàng)目基礎(chǔ)上，申請(qǐng)并成功獲得 8 項(xiàng)科研項(xiàng)目資助，累計(jì)資助經(jīng)費(fèi)396.8萬元，包含 1 項(xiàng)國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃，一項(xiàng)國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目，4項(xiàng)國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目，以及2項(xiàng)中央高?；究蒲许?xiàng)目。依托本項(xiàng)目，項(xiàng)目組成員先后共獲各類獎(jiǎng)項(xiàng)14項(xiàng)；依托本項(xiàng)目，共培養(yǎng)博士后1名，博士6名，碩士12名，項(xiàng)目成員中完成職稱晉升3人。
1)運(yùn)用光聲成像進(jìn)行膝骨關(guān)節(jié)炎模型及心肌梗死模型動(dòng)物的穴位敏化的微血管形態(tài)成像研究以及運(yùn)用激光散斑成像進(jìn)行穴位敏化的微循環(huán)灌注研究，完成了穴位敏化的組織微循環(huán)層次的客觀顯像研究。
2)運(yùn)用軟 X 射線納米 CT 完成穴位敏化的細(xì)胞結(jié)構(gòu) 3D 成像，運(yùn)用傳統(tǒng)甲苯胺藍(lán)染色、透射電鏡、免疫熒光等技術(shù)進(jìn)行穴位敏化細(xì)胞水平的 2D 成像，完成了穴位敏化的細(xì)胞層次客觀顯像研究。 3)運(yùn)用金納米微粒構(gòu)建可活體標(biāo)記敏化重要分子 5-HT 的分子探針，并在膝骨關(guān)節(jié)炎、心肌梗死模型 2 種動(dòng)物載體上應(yīng)用活體熒光和磁共振兩個(gè)成像平臺(tái)對(duì)不同疾病小鼠進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)的成像觀察，實(shí)現(xiàn)了穴位敏化的分子層次的客觀顯像研究。經(jīng)各組非穴區(qū)提取的微透析液刺激后的肥大細(xì)胞，胞內(nèi)充滿較多高密度的顆粒，未見低密度顆粒及空泡，在第 14d、21d 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯變化，參見圖48。經(jīng)各組陽陵泉穴穴區(qū)提取的微透析液刺激后的肥大細(xì)胞，模型組在第 14d 可見有顆粒脫出，低密度顆粒出現(xiàn)，顆粒膜與細(xì)胞膜相融合；在第21d，顆粒密度進(jìn)一步降低出現(xiàn)空泡樣結(jié)構(gòu)，與透射電鏡所示在體結(jié)果相一致。
